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环丙沙星(CPFX)酶联试剂盒行使办法

  本试剂盒用于鱼、虾和肉类组织(如鸡、牛肉和猪肉)、牛奶等中环丙沙星(CPFX)残留的定量检测。

  本试剂盒采用竞争ELISA方法,在微孔板包被有环丙沙星(CPFX)偶联抗原,加入环丙沙星(CPFX)标准品或样品,游离环丙沙星(CPFX)与微孔条上预包被的环丙沙星(CPFX)偶联抗原互相竞争抗环丙沙星(CPFX)抗体酶标记物,用TMB底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在450nm波长下进行检测,吸光值与样品中环丙沙星(CPFX)含量成反比,通过标准曲线计算样品中环丙沙星(CPFX)的含量。

  3.1 预包被的环丙沙星(CPFX)偶联抗原的可拆酶标板:1块(12孔×8条)。

  6.3 试剂盒使用前,将试剂恢复至室温(25±2℃),建议至少回温2小时。

  6.4 标准品中含有环丙沙星(CPFX),使用时应特别注意,操作时应带手套。

  6.7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用;不同标准品、样品所用吸头不得混用,否则会影响实验结果。

  8 样品处理程序(样品在提取过程中,要严格按说明书操作,提取过程中应准确稀释,否则会出现结果不准确,样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存)

  8.4取25µl处理后的样品,加入25µl样本稀释液于反应孔中(样本稀释倍数为2)

  9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温(25±2℃),时间约2小时。回温至室温(25±2℃)后再取出微孔条,多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存

  9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序,请严格按照要求操作

  9.2.1 预先进行编号,标记B0、标准品和样品的位置,推荐进行双孔检测

  9.2.2 取所需数量的微孔(微孔条可拆),将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存

  9.2.3 样品稀释液(10×)、浓缩洗涤液(20×)稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)

  9.3 37℃温浴30min (温浴过程中不时轻拍反应板,可以减少双孔误差)

  9.3.1 甩掉孔中液体,用洗液洗涤微孔板5次,最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。

  9.4.1 洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A,再加 50µl显色液B;轻微晃动反应板使之彻底混匀

  10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值(B)除以一个标准(0标准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。

  10.1.2以环丙沙星(CPFX)浓度的对数值为X轴,百分吸光度值为Y轴,绘制标准曲线图。根据样品百分吸光度值,可从曲线上得到对应点的横坐标,即为环丙沙星(CPFX)浓度的对数值,求得反对数即为测定液中环丙沙星(CPFX)浓度C(ng/ml)

  10.1.3由于样品经过了预先稀释,因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释倍数。

  10.1.1目测半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品吸光度值的高低比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

  10.1.2仪器半定量测定:首先选择一个适当的标准液与样品同运行,根据样品与标准品颜色深浅比较,判断样品浓度值是小于还是大于标准值。

  本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。